ساب کلونینگ ژن ngf در وکتورترشحی psectag۲/hygro و بیان آن در سلول های ردۀ pc۱۲

مقدمه: ساب کلونینگ ژن های اختصاصی در پلاسمیدها و انتقال آن ها به سلول های هدف به منظور تولید پروتئین های درمانی یا تمایز سلول به عنوان یکی از مؤثرترین روش های درمان برای بیماری های مختلف پیشنهاد می شود. فاکتور رشد عصب (ngf) یکی از اعضای خانواده نوروتروفین ها است. نوروتروفین ها خانواده ای از پروتئین ها هستند که میزان بقاء، تمایز و عملکرد انواع مختلف نورون ها را تنظیم می کنند. مطالعات نشان دادندکه بیان ژن ngf در سلول های بنیادی موجب القای تمایز به سمت سلول های شبه نورون و رشد آکسون و شاخه های آن می گردد. مواد و روش ها: در این تحقیق هضم آنزیمی بر روی یک پلاسمید حامل ژن ngf انجام گردید و این ژن استخراج شد. ژن ngf در پلاسمید ترشحی psectag2 ساب کلون گردید. پلاسمید ساب کلون شده رسوب گیری و تغلیظ گردید. سپس با استفاده از لیپوفکتامین به داخل سلول های ردۀ pc12 ترانسفکت شد. بیان ژن ngf و تولید پروتئین آن با استفاده از روش های rt-pcr و وسترن بلات ارزیابی گردید. یافته ها: تعیین توالی نشان داد که فرایند ساب کلونینگ پلاسمید ترشحی درست بوده است. بیان ژن ngf در سلول های ترانسفکت شده pc12 به وسیلۀ روش rt-pcr نشان داده شد و تولید پروتئین آن در نتایج وسترن بلات اثبات شد. نتیجه گیری: ساب کلونینگ ژن ngf بر روی وکتور ترشحی psectag2 یک روش مناسب جهت انتقال به سلول های یوکاریوتی می باشد.